Изучение толерантности исследуемых культур к факторам внешней среды
Страница 1

Биология » Микроорганизмы, выделенные из различных природных жиров » Изучение толерантности исследуемых культур к факторам внешней среды

Для исследования влияния внешних факторов на динамику роста и развития микроорганизмов, а также для культур, продуцирующих суммарный продукт жизнедеятельности микроорганизмов с максимальной липолитической и минимальной протеолитической активностью провели скриннинговое исследование.

Для этого культивирование проводили в колбах Эрленмейера объемом 250 см3, содержащей 200 мл бактериальной суспензии на основе жидкой синтетической среды Рана (п.2.2.8). Количество вводимой биомассы 105 кл/см3 на 200 см3 рабочей жидкости. Культивирование микроорганизмов проводили в термостате при температуре (37±5)°С, осуществляя переменное механическое воздействие на встряхивателе «Shaker Type-357», с частотой колебаний 200 об/мин, амплитудой 6 по 2 ч в сутки в течение 48 часов. Для изучения динамики активности микроорганизмов через каждые 24 часа снимали такие показания, как подсчет величины КОЕ (п.2.2.9), мутность (п.2.2.10), кислотность (п.2.2.11), активная реакция среды (п.2.2.16) после 48 часов культивирования был определен суммарный продукт жизнедеятельности микроорганизмов (п.2.2.12). Кроме того, определяли показатели для контрольной среды – не зараженной культурами микроорганизмов.

Для определения липолитической и протеолитической активностей эндофермента бактериальную суспензию после 48 часов культивирования подвергали центрифугированию при 5000 об./мин. в течение 15 минут. Осадок, образующийся в результате центрифугирования замораживали, после чего растирали в фарфоровой ступке со стеклом, добавив 100 см3 дистиллированной воды. Полученную суспензию центрифугировали при 5000 об./мин. 10 минут для удаления стекла. После того как, стекло удалили в полученную жидкость вводили 30% от объема (NH4)2SO4 для высаливания белка и центрифугировали при 5000 об./мин. в течение 15 минут, после чего на стенках центрифужной пробирки образовывался желтый налет, который собирали в колбу Эрленмейера объемом 100 см3 и приливали 30 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивали и и отбирали пробы для определения липолитических, протеолитических свойств (п.2.2.13, 2.2.14) и суммарного продукта жизнедеятельности микроорганизмов.

Для определения липолитических и протеолитических свойств экзофермента в над осадочную жидкость полученную после первого центрифугирования при определении свойств эндофермента вводили 30% от объема (NH4)2SO4 для высаливания белка, и проводили все операции аналогично как при определении активностей эндофермента.

Протеолитическую активность определяли по методу Вильштеттера и Вальдшмидта-Лейтца (п.2.2.13) и рассчитывали по формулам (2) и (3).

Пример расчета протеолитической активности для культуры Н:

а = 1,4 мл.; ак = 1,29 мл.

А = (1,4-1,29) × 1,4 × 1 = 0,154 мг.

0,154 × 12 × 100

ПС = = 3,08 ед. на 1 г. культуры.

3 × 1 × 2 × 10

Липолитическую активность определяли по модифицированному методу Ота, Ямада (п.2.2.14) и рассчитывали по формуле (4).

Пример расчета липолитической активности для культуры Н:

В = 46,3 г/см3; А = 0,25 см3.

0,25 × 2 × 50

ЛС = = 0,54 ед./г.

46,3

Дальнейшие расчеты проводили аналогичным образом. Результаты, полученные после проведения скриннинговых исследований, представлены в таблице 4.

Таблица 4 – Результаты проведения скриннинговых исследований

Показания

Тип культуры

Н

Нв

В

3

8

Контр

48ч

48ч

48ч

48ч

48ч

рН

7,25

7,40

7,28

7,44

7,30

7,40

7,33

7,40

7,37

7,10

7,31

Кислотность, г/дм3

1,26

1,56

1,20

1,26

1,20

1,38

1,50

1,20

1,50

1,44

1,20

Оптическая плотность D5402

7,00

8,10

6,20

5,60

5,80

5,60

6,60

4,60

4,00

5,80

5,60

КОЕ, кл/см3

3,3×105

5,1×105

1,2×106

6,1×106

5,8×105

4,1×106

7,3×105

5,3×106

2,4×106

6,8×106

-

Сум-ый продукт жизн-ти, гр./дм3

0,08

0,05

0,17

0,04

0,03

-

Протеолитическая активность экзофермента, ед./гр.

3,08±0,12

5,32±0,25

8,26±0,23

3,36±0,27

5,60±0,32

-

Протеолитическая активность эндофермента, ед./гр.

1,82±0,23

3,64±0,19

2,66±0,31

5,60±0,24

11,2±0,30

-

Липолитическая активность экзофермента, ед./гр.

0,54±0,26

1,16±0,23

0,26±0,14

1,79±0,12

1,79±0,23

-

Липолитическая активность эндофермента, ед./гр.

0,83±0,21

2,15±0,17

0,76±0,28

2,87±0,26

3,59±0,11

-

Страницы: 1 2 3


Другое по теме:

Пища и охота
Леопард обычно охотится на рассвете или на закате солнца. Сначала он поджидает жертву, сидя в засаде, а затем молниеносно атакует ее. Это сообразительное животное, которое может быстро оценить ситуацию и использовать наиболее подходящий д ...

Фазовые переходы и симметрия
Переходы вещества из одной фазы в другую при изменении состояния системы называют фазовыми превращениями. Фаза - совокупность телесных объектов с определенным химическим составом и термодинамическими свойствами, отделенная от других фаз п ...

Место произрастания
Родина ландыша – Евразия. Об этом я рассказывал уже во введении, что перед ним преклонялись во Франции, Англии, России других странах. Предпочитает он богатые гумусом почвы, умеренно-влажные. Тене- и влаголюбив, поэтому растет в основно ...