Биуретовый метод определения белка по Ярош

Биология » Микроорганизмы, выделенные из различных природных жиров » Биуретовый метод определения белка по Ярош

Метод используется в растворах белков с концентрацией от 0,04 до 1,6 мг/см3.

Необходимые реактивы. Биуретовый реактив – в мерную колбу на 1 дм3 наливают 400 см3 0,2н раствора NaOH, добавляют 9г калия-натрия виннокислого, перемешивают до полного растворения, добавляют 3г сульфата меди (порошка) и 5г йодистого калия, объем доводят до метки 0,2н раствором NaOH; раствор мочевины – к 300г мочевины (карбамида) прибавляют кусочек тимола величиной с горошину, приливают 700 см3 дистиллированной воды и смесь нагревают, затем прибавляют 3г активного угля, перемешивают фильтруют в мерную колбу на 1 дм3, объем доводят до метки дистиллированной водой.

Техника определения. В пробирку наливают 2,4см3 раствора мочевины, 0,1см3 раствора белка и 2,5см3 биуретового реактива. Смесь хорошо перемешивают и пробирки помещают в водяную баню при температуре 40оС на 10 минут. Затем их охлаждают до 20оС. Через 30 минут после добавления биуретового реактива раствор колориметрируют на ФЭК при длине волны 540нм. Количество белка находят по калибровочной кривой, составленной по яичному альбумину.

Для построения калибровочной кривой готовят исходные водные растворы с содержанием 10, 20, 30, 40, 50, 60 мг белка в 10см3. Из полученных растворов отбирают в пробирки по 0,1см3, добавляют 2,4см3 раствора мочевины и 2,5см3 биуретового раствора и ведут определение описанным выше методом. Калибровочный график представлен на рисунке 3

Рисунок 3 – Калибровочный график зависимости оптической плотности от содержания белка


Другое по теме:

Уход и размножение
Размножают ландыш делением корневищ. Выкапывают их осенью, когда листья пожелтеют. Разрезанные на части корневища сажают осенью или ранней весной на глубину около 3 см и на расстоянии 20-30 см друг от друга. Рекомендуется подкармливать р ...

Физико-географическая характеристика Амурской области
Амурская область лежит в умеренном географическом поясе. Самая северная точка Амурской области находится на реке Хани (приток Олек-мы), а самая южная - на Амуре, самая западная - на границе с Забайкальем, восточная - на хребте Ям-Алинь. ...

Гомо хабилис и Гомо эректус
Первые представители рода Люди (Хомо) появляются около 2,5 млн.лет назад. Будем считать, что человек в узком, родовом смысле этого слова – существо, способное интеллектуально и физически создавать орудия труда, его мозг и рука достаточно ...