Ход работы
Страница 2

Вычислили содержание пигментов в вытяжке, тут же посчитали их содержание с учетом объема, массы пробы и разведения.

Fа = 9*20/1000*1 = 0,18г/г

Fв = 67,4*20/1000*1 = 1,35 мг/г

Fкар = -17*20/1000*1 = -0,34 мг/г

Нанесение пигментов на бумагу

Для разделения пигментов используют лист бумаги размером 16х16 см.

При одномерной хроматографии 1 мл полученной вытяжки наносят полосой длиной 12 см на расстоянии 2 см от нижнего края листа. Нанесли 1,4 мл образца.

Разделение пигментов на одномерной хроматограмме

На одномерной хроматограмме в зависимости от применяемой для разгонки смеси растворителей удается отделить каротин, ксантофиллы и хлорофилл а и в.

Хроматограмму помещают в камеру, заполненную 30 мл смеси, состоящей из бензола и петролейного эфира (2:1). Через 30-40 минут, когда фронт растворителя поднимется на 14 см и будет видно четкое разделение пигментов, хроматограмму вынимают и подсушивают. Самую верхнюю полосу образует каротин, ниже него лежит хлорофилл а, под ним распологаются ксантофиллы, а самый последний – хлорофилл в.

Окрашенные полосы, соответствующие пигментам вырезают, измельчают и переносят в отдельные бюксы на 25 мл. Каротин эллюируется хлороформом, ксантофиллы и хлорофиллы – смесью спирта с ацетоном (1:3).

Растворитель добавляют небольшими порциями, каждый раз настаивая 2-3 минуты.

Эллюция пигментов с бумажного носителя

Эллюцию проводят до полного обесцвечивания бумаги. Элюат фильтруется через стеклянный фильтр или центрифугируется для удаления взвешенных частиц бумаги. Экстракт аккуратно сливают в мерные пробирки и доводят до 5-10 мл в зависимости от интенсивности окрашивания. Полученные экстракты используют для фотоколориметрии с использованием калибровочной кривой, построенной для определенного прибора.

Для получения калибровочных кривых использовали два раствора – раствор Гетри (для зеленых пигментов) и двухромовокислый калий (для желтых пигментов).

Определение оптической плотности пигментов

Оптическую плотность элюата определяют на фотоэлектроколориметре, за синим светофильтром для желтых пигментов и красным для зеленых. Желательно работать в средней области шкалы, где относительная ошибка прибора минимальна.

Оптическая плотность элюата

Д

Хлорофилл а

Хлорофилл в

каротин

0,015

0,01

0,025

Перед тем, как рассчитать содержание пигментов, была построена калибровочная кривая. Использовали раствор известной концентрации 1% CuSO4*5H2O – 25,5 мл; 2%К2Сr2O7 – 50 мл; 7% - NН4ОН (100мл раствора).

Желтые пигменты

разведение

Д

1:0

0,745

1:1

0,35

1:2

0,274

1:3

0,235

1:4

0,19

1:5

0,165

1:6

0,133

Страницы: 1 2 3


Другое по теме:

Молекулярная биология
Молекулярная биология возникла в начале 50х годов, когда Дж. Уотсон и Ф. Крик расшифровали структуру ДНК, что позволило начать изучение путей хранения и реализации наследственной информации. Крупнейшие достижения молекулярной биологии отк ...

Типы тканей. Эпителиальная ткань
Эпителиальная (покровная) ткань, или эпителий, представляет собой пограничный слой клеток, который выстилает покровы тела, слизистые оболочки всех внутренних органов и полостей, а также составляет основу многих желез. Эпителий отделя ...

Природные, климатические и медоносные условия
Учитывая природные ресурсы местности (д. Мостовка) где сохранились естественные медоносные угодия, позволяют заниматься пчеловодством. Не перевозя пасеку, так как везде произрастает одна и та же медоносная растительность, а кочёвка требуе ...