Иммунологическая специфичность
Страница 2

Биология » Иммунологическая специфичность » Иммунологическая специфичность

Определение АН можно провести экспериментально — либо с помощью прямых калориметрических измерений, либо из зависимости равновесной константы комплексообразования от температуры, описываемой законом Вант-Гоффа:

Д# рассчитывают из температурной зависимости логарифма константы равновесия от обратной температуры.

Зная изменения энтальпии равновесного процесса АН и свободной энергии AF, при данной температуре изменение энтропии находят из соотношения

Реакция антиген — антитело.протекает с выделением теплоты, но, как правило, изменение энтальпии невелико и составляет около 40 кДж/моль. Изменение энтропии в большинстве случаев положительно, так как активные центры антител в свободном виде доступны растворителю и гидратированы, а при взаимодействии с антигеном из них высвобождаются связанные молекулы воды, что приводит в целом к уменьшению упорядоченности системы. Таким образом, говоря об иммунологической специфичности антител, мы всегда проводим сравнительную оценку эффективности взаимодействия антиген—антитело, которое характеризуется константой равновесия или изменением свободной энергии системы при комплексообразовании.

Можно оценивать как специфичность данного антитела по отношению к различным антигенам, так и данного антигена по отношению к различным системам. Если одна и та же популяция антител взаимодействует с двумя различными антигенами An и Аг2 с константами комплексообразовании соответственно Кй и 2, то говорят, что данные антитела являются высоко специфическими по отношению к Аг] и менее специфическими к Агг. Аналогично, если константа комплексообразования антигена с популяцией антител Бфй много больше, чем с антителами Атг, то первые являются специфическими по отношению к антигену, а вторые нет. Еще раз подчеркнем, что понятие специфичности является относительным. Например, если для одной и той,же популяции антител взаимодействие с антигеном Аг] по сравнению с Аг2 является специфическим, то при наличии третьего антигена Агз, для которого Ks^Ki, эти антитела будут менее специфичны к Бгй, чем к Агз.

На практике часто условно подразумевают, что если константа равновесия процесса комплексообразования больше, чем 108 л/моль, то антитела являются высокоаффинными.

Обычный диапазон изменения аффинности антител составляет 105—10й М-1, что соответствует изменению свободной энергии связывания в области —24-.—52 кДж/моль. Максимальные значения констант связывания характерны для антигенов, обладающих ярко выраженными гидрофобными свойствами или же взаимодействующих с активным центром антитела достаточно большой областью молекулы. Наименьшей эффективностью взаимодействия характеризуются антитела против углеводов.

Таким образом, количественно специфичность можно оценить, измеряя изменение свободной энергии связывания или внутреннюю аффинность. В практических целях иногда очень важно провести сравнение специфичности взаимодействия ряда антигенов с антителами, индуцированными одним из этих антигенов. Относительная специфичность в этих случаях может быть выражена как отношение внутренних аффинностей взаимодействия с антителами рассматриваемого антигена и антигена, индуцировавшего антитела.

Подобного рода проблемы очень часто возникают, например, при разработке методов иммуноферментного анализа лекарственных препаратов, стероидных и белковых гормонов. В зависимости от способа получения антисыворотки антитела могут быть специфичны либо только к одному лекарственному препарату, либо к целой группе близких по структуре химических соединений. В этих случаях распространен способ оценки специфичности, основанный на сравнении связывания антител в данной концентрации одного и того же количества гомологичного и гетерологичного гап-тена. При этом концентрация образовавшегося иммунного комплекса для гомологичного гаптена принимается равной единице, а связывание всех гетерологичных гаптенов оценивается как доля от соответствующего связывания гомологичного гаптена.

Представляет большой интерес и оценка специфичности различных популяций антител, например различных типов моиокло-нальных антител, продуцируемых разными клонами клеток. Такое сравнение может быть проведено на основании сопоставления значений внутренней аффинности: антитела с более высокой специфичностью характеризуются более высоким значением константы внутренней аффинности.

Страницы: 1 2 


Другое по теме:

Качественный анализ вещества по ИК-спектрам поглощения
При измерении ИК-спектра твердого вещества работа ведется в следующей последовательности: – из предварительно высушенного вещества (3–5 мг) готовят суспензию в виде пасты (растирают вещество с несколькими каплями вазелинового масла); – ...

Выращивание двухлеток растительноядных рыб
Посадку годовиков этих видов рыб в нагульные пруды ведут с учетом особенностей их питания. Белый амур при плотных посадках в условиях поликультуры способен уничтожить всю растительность и перейти на потребление кормов, задаваемых карпу. П ...

Метод раздавленной капли
Применяется при исследовании морфологии и подвижности микроорганизмов. Каплю микробной суспензии помещают на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. При работе с культурой, выросшей на твердой среде, на предметное стекло на ...